产品及特点

尊龙凯时探针法荧光定量PCR检测试剂盒

本产品是基于探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，具有以下特点：

1. 即开即用

用户只需提供样品DNA模板，即可开始使用。

2. 高灵敏度

引物及其他组分经过优化，确保检测灵敏度高。

3. 附带阳性对照

产品提供阳性对照，有助于区分假阴性样品。

4. 高特异性

引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区，避免与其他生物样本的DNA发生交叉反应。

5. 定性与定量检测

本产品适用于定性和定量检测，定量检测时线性范围至少可达到五个数量级。

6. 充足的反应次数

本产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7. 仅限科研用途

本检测试剂盒仅限于科研使用。

使用方法

一、DNA提取

使用自选方法提取和纯化样品DNA。本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品

由于阳性对照浓度高，请在独立区域进行稀释，以避免污染样品或本试剂盒的其他成分：

1. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
2. 向每个管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10⁸拷贝/μL的阳性对照，震荡1分钟，得到1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品，放入冰上待用。
4. 相似操作重复至6号管，以上步骤依次稀释至获取各个稀释度的样品。
5. 如果不需要制作标准曲线，则将阳性对照稀释到1×10⁵拷贝/μL即可。

三、试剂配制

准备N个待检样品，使用N+2个qPCR管（N个检测样品+1个阴性对照+6个阳性对照），向各PCR管中加入相应成分，详细步骤可参考尊龙凯时提供的说明书。

四、添加模板

向qPCR管中加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板和婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应

将PCR管置于PCR扩增仪器中，按照指定的扩增程序进行反应，程序可参考尊龙凯时的详细说明书。

六、结果分析

结果判定根据阳性对照及阴性对照的Ct值进行，阳性对照Ct值<30且呈现典型的S型曲线，阴性对照Ct值38或无Ct值显示无明显增长；样本结果如Ct值<35，则结果为阳性；Ct值38或无Ct值则为阴性；在35-38范围内需复检，重复结果仍在此范围内且有指数增长则判定为阳性，反之为阴性。

运输及保存

本产品需在低温下运输，保存温度为-20℃，保存期限为一年。阳性对照需要单独存放，避免污染其他试剂。